Определение чувствительности к антибиотикам: методы, результаты, оценка. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Интерпретация результатов определения чувствительности
Etest® представляет собой полоску из инертного пластика, на которую нанесен антимикробный препарат в концентрации, изменяющейся по градиенту от минимальной до максимальной, в диапазоне, эквивалентном 15 двукратным разведениям. С другой стороны на полоску нанесена шкала соответствующих минимальных ингибирующих концентраций (МИК). Е-тесты позволяют определять минимальную ингибирующую концентрацию антимикробного препарата (количественный диффузионный метод).
. Засейте чашку культурой микроорганизма.
. Разместите полоски Etest® (до 2 на стандартную чашку диаметром 90 мм, или до 6 на чашку диаметром 180 мм).
. В процессе культивирования вокруг полоски сформируется эллипсовидная зона ингибирования роста, которая пересекает стрип в точке, соответствующей МИК.
. Е-тесты используются более 20 лет.
. Более 100 антимикробных препаратов.
. Стрипы для выявления полирезистентности.
. Определение чувствительности прихотливых микроорганизмов, стрептококков, анаэробных микроорганизмов, грибов (в т.ч. плесневых), микобактерий туберкулеза и пр.
. Удобная форма выпуска: по 30 или 100 штук, в блистерной упаковке или пенопластовом картридже.
Номер по каталогу | |||||
Индивидуальная упаковка |
Пенопластовый картридж (t° хранения +20°С / +4°С) |
(t° хранения -20°С) |
|||
Наименование | 30 стрипов | 100 стрипов | 30 стрипов | 100 стрипов | 30 стрипов |
Противогрибковые | |||||
E-тест Амфотерицин | 526318 | 526310 | |||
E-тест Анидулафунгин | 532008 | 532000 | |||
E-тест Вориконазол | 532818 | 532810 | |||
E-тест Итраконазол | 412380 | 525818 | 525810 | ||
E-тест Каспофунгин | 412269 | 532418 | 532410 | ||
E-тест Кетоконазол | 525918 | 525910 | |||
E-тест Микафунгин | 535708 | 535700 | |||
E-тест Позаконазол | 532118 | 532110 | |||
E-тест Флюконазол | 412350 | 510818 | 510810 | ||
E-тест Флюцитозин | 510918 | 510910 | |||
Противотуберкулезные | |||||
E-тест Изониазид | 527900 | ||||
E-тест Этамбутол | 527700 | ||||
E-тест Этионамид | 527500 | ||||
Противобактериальные | |||||
E-тест Азитромицин | 412251 | 501618 | |||
E-тест Азтреонам | 412259 | 501718 | 501710 | ||
E-тест Амикацин | 412219 | 501318 | |||
E-тест Амоксициллин | 412243 | 500918 | |||
E-тест Амоксициллин / клавулановая кислота (2/1) | 412241 | 501018 | 501010 | ||
Е-тест Ампициллин | 412253 | 501518 | |||
E-тест Ампициллин/сульбактам (2/1) | 412251* | 501818 | 501810 | ||
E-тест Бацитрацин | 528608 | 528600 | |||
E-тест Бензилпенициллин (высокая концентрация) | 412263 | 502518 | |||
E-тест Бензилпенициллин (низкая концентрация) | 412265 | 502618 | |||
E-тест Ванкомицин | 412488 | 525518 | |||
E-тест Гатифлоксацин | 530218 | 530210 | |||
E-тест Гентамицин (высокая концентрация) | 512708 | 512700 | |||
E-тест Гентамицин (низкая концентрация) | 412368 | 512518 | |||
E-тест Даптомицин | 412324 | 535018 | 535010 | ||
E-тест Доксициклин | 412328*** | 509718 | 509710 | ||
E-тест Дорипенем | 412326*** | 535918 | 535910 | ||
E-тест Имипенем | 412374 | 513618 | |||
E-тест Канамицин | 527818 | 527810 | |||
E-тест Кларитромицин | 508718 | 508710 | |||
E-тест Клиндамицин | 412315 | 509518 | |||
E-тест Колистин | 412317** | 537308 | 537300 | ||
E-тест Левофлоксацин | 412393 | 527418 | |||
E-тест Линезолид | 412396 | 531318 | |||
E-тест Меропенем | 412402 | 513818 | |||
E-тест Метронидазол | 412404 | 530018 | |||
E-тест Мециллинам | 513708 | 513700 | |||
E-тест Миноциклин | 412409*** | 516018 | 516010 | ||
E-тест Моксифлоксацин | 412411** | 529018 | 529010 | ||
E-тест Мупироцин | 412417*** | 413496 | 516300 | ||
E-тест Налидиксовая кислота | 516508 | 516500 | |||
E-тест Нетилмицин | 517518 | 517510 | |||
E-тест Нитрофурантоин | 412426*** | 530408 | 530400 | ||
E-тест Норфлоклацин | 412428** | 519508 | 519500 | ||
E-тест Оксациллин | 412432 | 520518 | |||
E-тест Офлоксацин | 519618 | 519610 | |||
E-тест Пиперациллин | 521518 | 521510 | |||
E-тест Пиперациллин/тазобактам (4мкг/мл) | 412434 | 521418 | |||
E-тест Полимиксин | 533408 | 533400 | |||
E-тест Рифампицин | 412450 | 526018 | 526010 | ||
E-тест Спектиномицин | 529218 | 529210 | |||
E-тест Стрептомицин | 412454 | 526808 | 526800 | ||
E-тест Сульфаметоксазол | 534118 | 534110 | |||
E-тест Тейкопланин | 412461 | 522018 | |||
E-тест Тетрациклин | 412471 | 522518 | |||
E-тест Тайгециклин | 412475 | 533518 | |||
E-тест Тикарциллин/клавулановая кислота | 522618 | 522610 | |||
E-тест Тобрамицин (высокая концентрация) | 533108 | 533100 | |||
E-тест Тобрамицин (низкая концентрация) | 522718 | 522710 | |||
E-тест Триметоприм | 523618 | 523610 | |||
E-тест Триметоприм/сульфаметоксазол (1/16) | 412481 | 524418 | |||
E-тест Фосфомицин | 529108 | 529100 | |||
E-тест Фузидиева кислота | 511518 | 511510 | |||
E-тест Хинупристин/дальфопристин | 528718 | 528710 | |||
E-тест Хлорамфеникол | 412309 | 507518 | 507510 | ||
E-тест Цефаклор | 504518 | 504510 | |||
E-тест Цефалотин | 412307 | 503518 | 503510 | ||
E-тест Цефепим | 412273 | 505018 | 505010 | ||
E-тест Цефиксим | 412275 | 529918 | 529910 | ||
E-тест Цефокситин | 412285 | 506518 | 506510 | ||
E-тест Цефоперазон/сульбактам (2/1) | 529318 | 529310 | |||
E-тест Цефотаксим (высокая концентрация) | 412279 | 505518 | |||
E-тест Цефотаксим (низкая концентрация) | 412281 | 505618 | |||
E-тест Цефотетан | 506308 | 506300 | |||
E-тест Цефпиром | 506408 | 506400 | |||
E-тест Цефподоксим | 505818 | 505810 | |||
E-тест Цефтазидим | 412293 | 506718 | |||
E-тест Цефтаролин | 412291 | ||||
E-тест Цефтизоксим | 527308 | 527300 | |||
E-тест Цефтобипрол | 412297 | ||||
E-тест Цефтриаксон (высокая концентрация) | 412301 | 506618 | 506700 | ||
E-тест Цефтриаксон (низкая концентрация) | 412303 | 507018 | 507000 | ||
E-тест Цефуроксим | 506918 | 506910 | |||
E-тест Ципрофлоксацин | 412311 | 508618 | |||
E-тест Энрофлоксацин | 528908 | 528900 | |||
E-тест Эритромицин | 412334 | 510518 | |||
E-тест Эртапенем | 412332 | 531618 | 531610 |
Номер по каталогу |
|||
Индивидуальная упаковка |
Пластиковая секционная упаковка (t° хранения -20°С) |
||
Наименование | 30 стрипов | 100 стрипов | 30 стрипов |
Определение полирезистентности | |||
E-тест Цефотаксим / Цефотаксим + клавулановая кислота (4 мкг/мл) |
412336** | 532208 | 532200 |
E-тест Цефтазидим / Цефтазидим + клавулановая кислота (4 мкг/мл) Предназначен для определения наличия ферментов бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС), ингибируемых клавулановой кислотой, у грамотрицательных бактерий, в том числе Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, других представителей семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412340** | 532508 | 532500 |
E-тест Цефепим / Цефепим + клавулановая кислота (4 мкг/мл) Предназначен для определения наличия ферментов бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС), ингибируемых клавулановой кислотой, у грамотрицательных бактерий, в том числе Klebsiella spp., Escherichia coli, Proteus mirabilis, других представителей семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa |
412338** | 534708 | 534700 |
E-тест Имипенем / Имипенем + ЭДТА Предназначен для определения наличия ферментов металло-бета-лактамаз у грамотрицательных бактерий, в том числе Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. | 534208 | 534200 | |
E-тест Ванкомицин / Тейкопланин Предназначен для определения устойчивости (или умеренной устойчивости) к гликопептидам грамположительных бактерий, в том числе Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. |
537208 | 537200 | |
E-тест Цефотетан / Цефотетан + клаксациллин Предназначен для определения наличия ферментов AmpC-бета-лактамаз у грамотрицательных бактерий |
537108 | 537100 |
Е-тест (Etest ) — хорошо продуманный метод для определения антибиотикочувствительности в лабораториях всего мира. Он широко применяются в изучении резистентности как в диагностических, так и в испытательных клиниках. Тест представляет собой количественный метод определения МИК противогрибковых и антибактериальных препаратов для инфекционных агентов, в том числе септических, что особенно важно для тяжелых больных. В этом методе в настоящий момент насчитывается 100 с лишним антибиотиков для тестирования ряда аэробных бактерий и привередливых организмов, таких как пневмококки, гемофильные микроорганизмы, H.pylori, менингококки, гонококки, анаэробны, грибы, и микобактерии. Е-тест дает возможность рационального использования антибиотиков, обеспечивающих наилучший результат для пациентов, а так же для коррекции схемы лечения после эмпирического назначения препаратов. Тест чрезвычайно важен для определения дозы антибиотика у пациентов с топографически труднодоступной локализацией очага инфекции (нр. эндокардит), при некоторых внутрибольничных инфекциях, хронических инфекциях и у пациентов с иммунодефицитом.
Е-тест — уникальная запатентованная техника. Его принцип состоит в том, что на пластиковую тест-полоску нанесены последовательные разведения антибиотика от меньшего к большему и позволяет точно определить, по меньшей мере, по 15-ти разведениям антимикробную активность бактериальных агентов как прихотливых так и нет.
Процедура проведения теста проста, стрип с реагентом кладется на поверхность засеянного агара из стандартного разведения. После инкубации результат считывается по нанесенной на пластинку шкале разведений по месту пересечения зоны задержки роста, виде эллипса, с тест-полоской.
Е-тест имеет ряд преимуществ в контроле резистентности, т. к. он содержит градиент концентраций, способный показать малейшие изменения чувствительности. Ширина градиента концентраций этого теста покрывает вариации чувствительности микроорганизмов и определяет как низкий, так и высокий уровни резистентности.
Это наиболее чувствительный тест на сегодня. Е-тест — это макрометод, который может быть легко внедрен в лабораторию для определения чувствительности. В эру открытия все новых инфекций и возрастающей резистентности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, Е-тест признан во всем мире как важнейшая инновация в определении антимикробной активности.
В каталоге Биомерье 2013 года на стр. 33 - 36 представлен вполный перечень Е-тестов (100 наименований):
- Противобактериальные
- Противогрибковые
- Противотуберкулезные
- На определение полирезистентности
Наименование | Кат. № | |
противогрибковый |
20306 | |
19364 | ||
20307 | ||
20457 | ||
21040 | ||
21053 | ||
21055 | ||
19361 | ||
19362 | ||
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранить 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19363 | |
упаковка представляет собой блистер (пластиковая секционная упаковка), состоящий из 10 ячеек, каждая из которых содержит по 3 стрипа (противобактериальные). Хранение при -20°С |
19365 | |
Упаковка представляет собой блистер (пластиковая секционная упаковка), состоящий из 10 ячеек, каждая ячейка содержит по 3 стрипа (противобактериальные). Хранение при -20°С |
19366 | |
Упаковка представляет собой блистер (пластиковая секционная упаковка), состоящий из 10 ячеек, каждая из которых содержит по 3 стрипа (противобактериальные). Хранение при -20°С |
19359 | |
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранить 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19371 | |
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранить 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19375 | |
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранить 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19374 | |
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранить 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19373 | |
Упаковка представляет собой блистер (пластиковая секционная упаковка) из 10 ячеек, каждая ячейка содержит по 3 стрипа (противобактериальные). Хранение при -20°С |
19372 | |
Упаковка представляет собой блистер (пластиковая секционная упаковка) из 10 ячеек, каждая ячейка содержит по 3 стрипа (противобактериальные). Хранение при -20°С |
19370 | |
|
Упаковка из фольги содержит картридж из пенного материала с 30 стрипами и влагопоглотитель; хранение 2-8°С или при контролируемой комн. t°С |
19360 |
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы:
1. Диффузионные методы:
. с использованием дисков с антибиотиками
. с помощью Е-тестов
2. Методы серийных разведений:
. разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
. разведение в агаризованной среде
Методы определения чувствительности были разработаны во второй половине 60-х - начале 70-х годов XX века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений.
Для всех методов общими являются следующие этапы:
- приготовление и проверка качества питательных сред
- приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)
- инокуляция
- для дифузионных методов - этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.
- инкубирование
- учет и интерпретация результатов
- формулировка рекомендаций по Лечению
Диффузионные методы основаны на диффузии антибактериального препарата (АБП) из носителя в плотную питательную среду, инокулированную микроорганизмом, и регистрации диаметра зоны ингибирования (задержки) роста исследуемого микроорганизма.
. Метод менее чувствителен и менее точен, чем метод серийных разведений, но на практике применяется чаще из-за своей простоты. Размещено на реф.рф.
. Скорость диффузии в агар любого препарата зависит от его структуры, молекулярной массы, наличия примесей, состава и рН среды.
Метод бумажных дисков с антибиотиком (дискодиффузионный метод).
. Для проведения этого метода используют стандартные диски, содержащие определенное количество антибиотиков, и стандартную питательную среду, необходимую для роста данного вида микроорганизма. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. . На поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности. . Помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. . Инкубируют при уcловиях, благоприятных для каждого конкретного микроорганизма. . Измеряют диаметры зон задержки роста вокруг диска в миллиметрах (с учетом диаметра диска). . Оценивают результат по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице. . Исследуемую культуру относят к одной из трех категорий: чувствительная, умеренно- чувствительная и устойчивая
Е-тест (E-test или эпсилометрический метод)
Метод близок по технологии постановки к методу бумажных дисков.
. В качестве носителя используется узкая полоска полимера (0.5х6.0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Значения концентрации АБП в каждом участке полоски нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности.
. Ингибирование роста микроорганизма вокруг полоски носителя происходит в зоне, где концентрация антибиотика, диффундирующего из носителя, выше МПК.
. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е- теста получают значение МПК.
Е-тест сочетает простоту постановки метода бумажных дисков и точность метода серийных разведений
Методы, используемые для сравнительной оценки in vitro лекарственных средств антимикробной терапии: метод серийных разведений в жидкой и плотной питательных средах.
Методы серийных разведений:
. Позволяют количественно оценить чувствительность выделенного микроорганизма к антибактериальным средствам и определить МПК препарата.
. Используют для сравнительной оценки антимикробной активности in vitro разрабатываемого препарата-генерика и оригинального средства.
. Для определения величины МПК заданные концентрации антибиотиков вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма. После инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.
. Основаны на использовании двукратных последовательных разведений концентраций АБП от максимальной к минимальной (например, от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл).
. Проводятся в жидкой и агаризованной питательных средах. Метод серийных разведений в жидкой питательной среде (бульоне)
Существует 2 варианта данного метода:
макрометод (пробирочный) и микрометод (планшетный).
Макрометод.
. Тестирование проводят в пробирках в конечном объеме 1 мл для каждого разведения.
. Питательный бульон разливают по 0,5 мл в каждую пробирку. Количество пробирок определяют необходимым диапазоном разведений АБП.
. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов:
- Из стандартной суспензии каждого исследуемого микроорганизма (~ 10 8 КОЕ/мл) готовят рабочую суспензию (~ 10 6 КОЕ/мл) . Приготовление двукратных серийных разведений АБП: - готовят основной раствор АБП исследуемого препарата-генерика и препарата сравнения (оригинального) в концентрации 1000 мкг/мл и выше (с учетом содержания содержания активного вещества). -из основных растворов АБП исследуемого препарата-генерика и препарата сравнения (оригинального) готовят рабочие растворы АБП с использованием жидкой питательной среды. (Концентрация рабочих растворов рассчитывается исходя из необходимой максимальной концентрации в ряду серийных разведений с учетом фактора разбавления при последующей инокуляции суспензией микроорганизма) ‐ готовят серийные разведения: 0,5 мл рабочего раствора АБП вносят в первую пробирку, содержащую 0,5 мл бульона. Перемешивают. Новой пипеткой (наконечником) переносят 0,5 мл раствора АБП в бульоне во вторую пробирку, содержащую 0,5 мл бульона и т.д., пока не будет приготовлен весь необходимый ряд разведений. Из последней пробирки 0,5 мл удаляют. Т.о., получают ряд пробирок с растворами АБП, концентрации в которых отличаются в соседних пробирках в 2 раза. Инокуляция: по 0,5 мл микробной суспензии с концентрацией микроорганизма ~ 10 6 вносят в каждую пробирку с 0,5 мл соответствующего разведения АБП. Конечная концентрация микроорганизма в каждой пробирке ~ 5х10 5 КОЕ/мл. . Контроль - пробирка с бульоном и культурой микроорганизма (контроль роста). Отрицательный контроль - пробирка с бульоном (контроль стерильности). . Инкубирование: все пробирки, закрытые пробками, или колпачками, инкубируют при условиях, обеспечивающих рост испытуемых микроорганизмов. . Учет и интерпретация результатов: пробирки с посевами просматривают в проходящем свете. Рост культуры в пробирке с АБП сравнивают с контрольной пробиркой. - наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. ‐ по мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). лекарственных средств антибактериальной терапии - сравнивают результаты, полученные для оригинального ЛС и исследуемого генерического ЛС. Делают вывод об их эквивалентности в отношении спектра (перечень используемых микрорганизмов) и степени антимикробной активности (значения МПК).
. Определение МБК: из нескольких последних пробирок с задержкой роста делают посев петлей на сектора чашки Петри. За МБК, которая, как правило, на несколько разведений меньше МПК, принимают концентрацию препарата в последней пробирке, посев из которой не дал роста. . Недостаток метода: низкая производительность - применение ограничивается исследованиями небольшого числа микроорганизмов.
Микрометод
.Процедура проведения испытания аналогична таковой при использовании макрометода
.Величина конечного объема - до 0,2 мл.Наличие соответствующего оснащения лаборатории: планшет на 96 лунок со стерильными крышками, многоканальных пипеток.Рабочие растворы АБП можно вносить в лунки планшет заранее, после чего хранить запаянными в полиэтилене при температуре ниже 60°С до момента использования. . Преимущества метода: - высокая производительность - возможность длительного хранения заранее приготовленных планшет - экономия расходных материалов. Размещено на реф.рф
Метод серийных разведений в агаризованной среде. Принцип проведения испытания аналогичен методу разведений в бульоне. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов: - стандартная суспензия каждого исследуемого микроорганизма должна содержать ~ 10 8 КОЕ/мл. - стандартную микробную суспензию для проведения эксперимента разводят ~ в 10 раз до получения концентрации микроорганизма ~ 10 7 КОЕ/мл. Приготовление двукратных серийных разведений АБП для оригинального препарата и исследуемого препарата- генерика проводят аналогично методу разведений в бульоне. Агаризованную среду расплавляют и охлаждают до температуры 45-50°С. . Приготовление чашек с агаризованной средой и разведениями АБП: смешивают агаризованную среду и растворы АБП непосредственно в чашке Петри (для пластиковых чашек диаметром 90 мм к 2 мл раствора АБП добавляют 18 мл расплавленного и охлажденного агара). . Инокуляция и инкубирование: бактериологической петлей переносят 1-2 мкл суспензии исследуемых микроорганизмов на поверхность агаризованной среды. Таким образом, конечная посевная доза составляет ~ 10 4 КОЕ (стандартная бактериологическая петля диаметром 3 мм переносит 1-2 мкл жидкости). . На поверхности агара образуется пятно диаметром 5-8 мм. После подсыхания чашки переворачивают и инкубируют при условиях, благоприятных для роста исследуемых микроорганизмов. . Учет и интерпретация результатов: аналогично методу разведения в бульоне. Чашки Петри помещают на темную, не отражающую свет поверхность. За МПК принимают концентрацию АБП, вызвавшую полное ингибирование видимого роста. . Контроль: инокулированные суспензией культур микроорганизмов чашки с агаром без АБП (контроль роста). Отрицательный контроль: чашки с агаром (контроль стерильности). Преимущества метода: на одной чашке можно определять чувствительность нескольких микроорганизмов.
Объем исследований по сравнительной оценке in vitro антимикробной активности для генерических и оригинальных средств антимикробной терапии.
Объем исследований по сравнительной оценке in vitro антимикробной активности генерических противомикробных лекарственных средств:
.Задача исследования: подтверждение соответствия генерического препарата референсному (оригинальному) по спектру (микроорганизмы) и степени (значение МПК, МБК) антимикробной активности.
.Набор тестируемых микроорганизмов: по 1-2 штамма каждого из входящих в спектр действия микроорганизмов
- эталонные коллекционные штаммы
-выделенные в стационарах клинические штаммы
.Определяются значения МПК и МБК
.Контроль: препарат сравнения - оригинальный препарат
.Ожидаемый результат: МПК и МБК разрабатываемых генерических противомикробных ЛС входят в допустимые диапазоны значений и полностью совпадают с МПК и МБК препаратов сравнения (оригинальных ЛС) в отношении коллекционных и клинических штаммов.
Порядок исследований по определению in vitro антимикробной активности новых противомикробных соединений:
.Первичная оценка чувствительности к новым соединениям эталонных штаммов различных видов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов (4-5 штаммов для каждого вида);
.Детальное изучение степени антибактериальной активности соединений в отношении штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов из международных коллекций с известными механизмами резистентности (метод серийных разведений);
.Исследование активности в отношении клинических штаммов условно патогенных и патогенных микроорганизмов в сравнении с известными препаратами близкой химической группы или аналогичными по антимикробному эффекту:
- в случае преимущественной активности в отношении грамположительных микроорганизмов контроль - природные пенициллины, цефалоспорины I - II поколений, макролиды, линкозамиды; - при активности в отношении грамотрицательных микроорганизмов контроль - полимиксин В, азтреонам; -для препаратов широкого спектра действия контроль - полусинтетические пенициллины, аминогликозиды, тетрациклины, цефалоспорины III - IV поколений
. Оценка антимикробной активности в отношении проблемных возбудителей: метициллинорезистентные стафилококки, устойчивые к бензилпенициллину Streptococcus pneumonia, множественноустойчивые энтеробактерии, устойчивые к аминогликозидам бактерии рода Pseudomonas и др.
.Первоначальные терапевтические концентрации новых препаратов устанавливаются с учетом токсичности, определенной в опытах по изучению острой токсичности;
. Сравнительную степень антибактериальной активности препаратов оценивают величиной МПК или МБК, определяемых не менее, чем при 2-х значениях посевной дозы: минимальной - 10 4 - 10 5 КОЕ/мл и максимальной - 10 6 - 10 9 КОЕ/мл в зависимости от вида возбудителя; На сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.
Оглавление книги открыть закрыть
1. Фармацевтическая микробиология. Предмет и задачи фармацевтической микробиологии.
2. Фармация и фармацевтика: история возникновения и развития.
3. Лекарственное средство: определение, классификация.
4. Состав лекарственных средств | фармацевтическая субстанция, вспомогательное вещество.
5. Оригинальные и генерические лекарственные средства. Наименование лекарственных средств.
10. Действие повреждающих факторов на микроорганизмы. Влияние температурного фактора и его использование в фармацевтике.
11. Действие излучения на микроорганизмы, типы излучения.
12. Влияние на микроорганизмы химических повреждающих факторов
13. Стерилизация. Уровень гарантии стерильности (SAL). Критерии выбора метода стерилизации.
14. Термическая и химическая стерилизация
15. Контроль эффективности работы стерилизующих устройств.
16. Промышленная дезинфекция
17. Дезинфектанты и антисептики. Требования, предъявляемые к химическим дезинфектантам и антисептикам.
18. Консерванты и их использование в фармацевтическом производстве
Новые методы определения чувствительности бактерий к химиопрепаратам. Автоматические системы учёта результатов метода серийных разведений. Е-тест.
В настоящее время разработаны компьютеризованные системы , автоматически проводящие выделение бактерий из исследуемых образцов и определяющие их чувствительность к различным ЛС. Их основное достоинство - освобождение персонала бактериологических лабораторий от большого объёма рутинных исследований и чёткая стандартизация полученных результатов.
Широкое распространение этих устройств в отечественной практике ограничивает их стоимость. Среди более доступных методов наибольшее распространение нашли система Alamar и Е-тест , совмещающие в себе достоинства метода серийных разведений и метода дисков.
Новые методы определения чувствительности бактерий к химиопрепаратам. Автоматические системы учёта результатов метода серийных разведений">
Автоматические системы учёта результатов метода серийных разведений (например, Baxter MicroScan AutoSCAN-4) - автоматизированные инкубационные системы со встроенными фотометрами, нефелометрически регистрирующими рост бактерий или его отсутствие через 24 ч после внесения микроорганизмов в лунки микропанелей. Принцип действия основан на учете разницы оптической плотности среды в лунках, где есть рост бактерий, и в лунках, где его нет. В настоящее время разработаны устройства (например, VITEK), позволяющие получить результаты уже через 4-10 ч.
Система Alamar представляет собой панель с лунками, в каждую помещены диски из фильтровальной бумаги, содержащие различные концентрации антимикробных препаратов и пропитанные индикатором Alamar Blue. После внесения в лунку бактерий диск синеет, а при их дальнейшем росте его окраска меняется на розовую. Порядок размещения дисков в лунках соответствует двойным серийным разведениям препарата. Последняя лунка с синим диском, предшествующая лункам с порозовевшими дисками, соответствует МИК препарата.
Е-тест [от англ. ellipse, эллипс, так как при наличии чувствительности образуется зона задержки роста эллиптической формы] - модификация метода дисков, но вместо последних используют полоски из фильтровальной бумаги, пропитанной различными концентрациями препаратов, каждая из этих зон имеет соответствующую маркировку. Полоски помещают на поверхность агара. Если бактерии чувствительны к действию препарата, вокруг участков полоски, содержащих его ингибирующие концентрации, образуется эллипсовидная зона. Её форма обусловлена действием сразу нескольких концентраций препарата. МИК соответствует участок полоски, где её пересекает граница зоны задержки роста.